Validación de un ELISA para la cuantificación de las impurezas proteicas de la cepa hospedera en el principio activo de la vacuna recombinante cubana contra la hepatitis B / Validation of an ELISA for the quantification of protein impurities from host strain on the active principle of the Cuban recombinant vaccine against hepatitis B

Se validó un inmunoensayo tipo sandwich de doble anticuerpo para cuantificar las impurezas proteicas de la cepa hospedera que pueden estar presentes en el principio activo de la vacuna cubana contra la hepatitis B. Seprepararon los reactivos biológicos empleados en el ELISA. Las proteínas de la cepa hospedera se obtuvieron bajo las mismas condiciones que el proceso de producción de la proteína recombinante hasta un paso de semipurificación o purificación primaria. Los antisueros dirigidos contra las proteínas de la cepa hospedera segeneraron en conejos por un proceso de inmunización en cascada. Para la validación se analizaron los siguientesparámetros: linealidad, límite de detección y cuantificación, exactitud, rango y precisión. El ensayo establecido resultó específico, con una exactitud entre 89 por ciento y 109 por ciento para todos los tampones estudiados; se demostró un ajuste parabólico y un rango de trabajo entre 0,63 y 1,25 ng/mL, la repetibilidad y la precisión intermedia mostraron coeficientes de variación inferiores al 10 y 20 por ciento respectivamente(AU)

be present in the active pharmaceutical ingredient of Cuban vaccine against hepatitis B. All biological reagentsused in the ELISA were prepared and characterized. The proteins from the host strain were obtained under thesame conditions as the production process of the recombinant protein until a purification or primary emipurificationstep. The antisera addressed against those proteins were generated in rabbits by an immunization process incascade. For validation the parameters analyzed were: linearity, limit of detection and quantification, accuracy,range and precision. The established assay was specific, and the calculated accuracy was from 89 por ciento to 109por ciento for all studied buffers. A parabolic fit and a working range from 0.63 to 1,25 ng/mL were emonstrated. The repeatability and intermediate precision showed variation coefficients below 10 por ciento and 20 por ciento respectively(AU)

Estrategias de obtención de proteínas recombinantes en Escherichia coli / Strategies to obtain recombinant proteins in Escherichia coli

La expresión de proteínas recombinantes se ha favorecido con el uso de Escherichia coli debido a su relativo bajo costo, alta densidad de cultivo, su fácil manipulación genética y a las diversas herramientas biotecnológicas disponibles que son compatibles. En este artículo se presentan algunas estrategias para la expresión de Escherichia coli; se destacan factores genéticos y fisiológicos que incluyen: número de copias del vector de expresión, características del gen, estabilidad del ácido ribonucleico mensajero, promotor empleado, cepa utilizada, composición del medio de cultivo, parámetros de operación en el fermentador y también se abordan la conservación de cepas y la estrategia de cultivo y purificación(AU)

Recombinant protein expression has been favored by the use of Escherichia coli due to its relatively low costs, high-density culture, easy genetic manipulation and also to compatible biotechnological tools. Strategies for recombinant expression in E. coli are presented in this paper. Genetic and physiologic factors are presented: number of copies of the expression vector, characteristic of the gene, ribonucleic acid (messenger) stability, promoter, host strain, clone stability, composition of the cultivation media, operation parameters in the bioreactor and cultivation and purification strategies(AU)

Aplicación del análisis de riesgo a la producción de proteínas recombinantes expresadas en Escherichia coli / The risk analysis used to manufacture recombinant proteins in E coli

En este trabajo se aplicó el análisis de riesgo, empleando la metodología de análisis de modos y efectos de fallas a los procesos de fermentación que utilizan la bacteria Esherichia coli como hospedero, para obtener proteínas recombinantes con fines terapéuticos, vacunales o diagnósticos. Se realizó el análisis del tipo y probabilidad de ocurrencia de las fallas en el proceso fermentativo, la evaluación del impacto en la calidad del mismo y la probabilidad de detección de dichas fallas. Se evaluó la severidad, probabilidad de ocurrencia y probabilidad de detección y se calculó el número de probabilidades de riesgo. Además, se emplearon técnicas utilizadas para el aseguramiento de la calidad como: tormenta de ideas y diagrama causa-efecto. Se concluye que las causas potenciales que tienen mayor influencia en las fallas de un proceso fermentativo de E coli recombinante son: la inadecuada manipulación durante la inoculación, la presencia de fagos y el personal no calificado. Se proponen acciones a tomar para minimizar el riesgo(AU)

In this paper a risk analysis management is applied using the Failure Mode Effects Analysis to the fermentation processes that use E coli as a host, to produce recombinant proteins with therapeutic, vaccinate or diagnostic aims. The analysis of the type and probability of occurrence of failures in the fermentation process, the evaluation of the impact in the quality of the product and the probability of detection of these failures are carried out. The severity, occurrence probability and detection probability are evaluated and the risk priority number is calculated. Techniques used in Quality assurance as brainstorming and Ishikawa diagram were used. The potential causes that have higher influence in the failures of a fermentation process of recombinant E coli are: inadequate handling during inoculation, presence of phages and unqualified personnel. Actions to minimize the risks are proposed(AU)

Establecimiento y validación de un ensayo inmunoenzimático tipo ELISA, empleado en el control de calidad del Interferón alfa 2b humano recombinante / Establishment and validation of an ELISA-type immunoenzymatic assay, used for quality control of human recombinant alpha-2b Interferon

Se estableció y validó un ELISA para la cuantificación del Interferón alfa 2b humano recombinante en el Ingrediente Farmacéutico Activo, definiéndose los criterios de validez del ensayo y basado en el cumplimiento de las Buenas Prácticas de Laboratorio. Se evaluaron los parámetros de: linealidad, especificidad, exactitud, rango, precisión y robustez. El ensayo establecido resultó específico, con una exactitud entre 84,3 por ciento y 102,4 por ciento, se demostró un ajuste cuadrßtico y un rango de trabajo entre 1 y 10 ng/mL; la repetibilidad y la precisión intermedia mostraron coeficientes de variación inferiores al 10 por ciento y 20 por ciento respectivamente, y se comprobó la robustez del método con respecto al efecto borde y la estabilidad de las soluciones(AU)

An ELISA for quantification of human recombinant alpha-2b Interferon in the Active Pharmaceutical Ingredient (API) was established and validated, and the validity criteria for the assay were defined, based on Good Laboratory Practices compliance. The following parameters were evaluated: linearity, specificity, accuracy, range, precision and robustness. The assay was specific, with accuracy from 84,3 to 102,4 percent, a quadratic adjustment and a working range from 1 to 10 ng/mL, repetibility and intermediate precision with coefficients of variation lower than 10 percent and 20 percent respectively, and robustness confirmed in relation to the edge effect and the stability of solutions(AU)

Establecimiento de un material de referencia de trabajo para interleucina-2 recombinante / Establishment of a working reference material for recombinant interleukin-2

La interleucina-2 es una glicoproteína humana de 133 aminoácidos que resulta vital para obtener una respuesta inmunológica efectiva. En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología ha podido obtenerse por vía recombinante a partir de una cepa de Escherichia coli. Para el control de la calidad de cada lote producido se hizo necesaria la elaboración de un material de referencia de trabajo. En esta publicación se describen los pasos seguidos en la obtención del lote candidato y la preparación del material de referencia como tal. Se demostró que el patrón de trabajo preparado es homogéneo para el uso en las técnicas analíticas de control de calidad de la interleucina-2 y se predijo una pérdida de actividad inferior al 5 por ciento anual mediante un estudio de estabilidad acelerada. Se obtuvieron valores adecuados para la pureza del material de referencia, evaluada por electroforesis y para la actividad biológica, que se estableció con trazabilidad al material de referencia internacional para este producto

Establecimiento de un material de referencia para interferón gamma humano recombinante / Establishment of a reference material for human recombinant gamma interferon

Se caracterizó el lote de interferón gamma utilizado como material de referencia por diferentes técnicas analíticas y se demostró mediante los diferentes análisis de varianza realizados para cada una de las técnicas ensayadas, que el lote cumple con lo aceptado para ser usado como material de referencia. El estudio de homogeneidad realizado por la técnica de cromatografía líquida de alta eficacia en fase reversa demostró que el material de referencia posee el grado de homogeneidad requerido para su uso. El lote es estable por 2 años a – 70 °C, según estudios previos realizados a los lotes de producción de materia prima activa de interferón gamma humano recombinante

Establecimiento de un material de referencia para interferón gamma humano recombinante / Establishment of a reference material for human recombinant gamma interferon

Se caracterizó el lote de interferón gamma utilizado como material de referencia por diferentes técnicas analíticas y se demostró mediante los diferentes análisis de varianza realizados para cada una de las técnicas ensayadas, que el lote cumple con lo aceptado para ser usado como material de referencia. El estudio de homogeneidad realizado por la técnica de cromatografía líquida de alta eficacia en fase reversa demostró que el material de referencia posee el grado de homogeneidad requerido para su uso. El lote es estable por 2 años a 70 °C, según estudios previos realizados a los lotes de producción de materia prima activa de interferón gamma humano recombinante(AU)

Establecimiento de un material de referencia de trabajo para interleucina-2 recombinante / Establishment of a working reference material for recombinant interleukin-2

La interleucina-2 es una glicoproteína humana de 133 aminoácidos que resulta vital para obtener una respuesta inmunológica efectiva. En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología ha podido obtenerse por vía recombinante a partir de una cepa de Escherichia coli. Para el control de la calidad de cada lote producido se hizo necesaria la elaboración de un material de referencia de trabajo. En esta publicación se describen los pasos seguidos en la obtención del lote candidato y la preparación del material de referencia como tal. Se demostró que el patrón de trabajo preparado es homogéneo para el uso en las técnicas analíticas de control de calidad de la interleucina-2 y se predijo una pérdida de actividad inferior al 5 por ciento anual mediante un estudio de estabilidad acelerada. Se obtuvieron valores adecuados para la pureza del material de referencia, evaluada por electroforesis y para la actividad biológica, que se estableció con trazabilidad al material de referencia internacional para este producto(AU)

Estrategia para el establecimiento de las especificaciones de calidad en el centro de ingeniería genética y biotecnología de la Habana, Cuba / Strategy for setting the quality specifications at the center for genetic engineering and biotechnology in Havana, Cuba

El establecimiento de las especificaciones de calidad es un paso importante en el desarrollo de un nuevo producto biofarmacéutico y constituyen un compromiso legal con las autoridades regulatorias en le campo de los medicamentos. En el trabajo se presenta la estrategia seguida en el centro de ingeniería genética y biotecnología de la Habana, Cuba para el establecimento de las especificaciones de calidad...(AU)